簡(jiǎn)介：

該方法提供一種易于檢測(cè)的定量方案，用于體外測(cè)定破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收。破骨細(xì)胞接種于骨切片上，吸收坑的形成可以通過(guò)甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行定量。

實(shí)驗(yàn)材料和試劑：

1. 破骨細(xì)胞
2. 骨切片
3. 異丙醇
4. 甲苯胺藍(lán)（Sigma cat#198161）
5. 超純水
6. 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（Greiner , Cat#650185）

實(shí)驗(yàn)設(shè)備：

1. 骨形態(tài)測(cè)量系統(tǒng)(http://www.osteometrics.com/product_info.htm)
2. 超聲波清洗器

操作流程：

1. 破骨細(xì)胞接種于（250000 細(xì)胞/孔）含和不含顱骨成骨細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上（提前孔內(nèi)放置骨切片）。
2. 細(xì)胞在合適的培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)至少14天。
3. 此后，用PBS洗滌細(xì)胞兩次，在250ul 70%異丙醇中，用超聲波高功率處理至少15分鐘，使細(xì)胞從骨切片脫落。
4. 250ul 70%異丙醇處理使細(xì)胞更容易從骨切片脫落。
4. 加入100ul 甲苯胺藍(lán)溶液（1%溶解于水），室溫染色2分鐘。
5. 用250ul 超純水沖洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的殘留物。
6. 吸收坑被染成深藍(lán)色（圖1），吸收坑面積可以通過(guò)骨測(cè)量系統(tǒng)進(jìn)行量化或者吸收坑可通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。

參考文獻(xiàn)：（以上流程來(lái)源于參考文獻(xiàn)，僅供參考）
Scholtysek, C., Katzenbeisser, J., Fu, H., Uderhardt, S., Ipseiz, N., Stoll, C., Zaiss, M. M.,
Stock, M., Donhauser, L., Bohm, C., Kleyer, A., Hess, A., Engelke, K., David, J. P.,
Djouad, F., Tuckermann, J. P., Desvergne, B., Schett, G. and Kronke, G. (2013).
PPARbeta/delta governs Wnt signaling and bone turnover. Nat Med 19(5): 608-613.

產(chǎn)品訂購(gòu)： 

品牌	英文名稱	中文名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Bone slice	Bone Slice	骨切片	250	50片（200um）
Bone slice	Bone Slice	骨切片	200	50片（400um）
IDS	Bone slice	骨切片	DT-1BON1000-96	50片（200um）