| 產品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
應用 |
| PLT VASP/P2Y12 |
7014 |
10T |
利用雙染流式細胞術，通過VASP的磷酸化作用，測定P2Y12受體活性。 |
1 簡介：
血管擴張刺激磷蛋白（VASP）是一種重要的細胞內血小板蛋白，基礎狀態(tài)下處于非磷酸化狀態(tài)。其磷酸化，是受cAMP (環(huán)磷酸腺苷) 級聯(lián)調節(jié)。前列腺素E1(PGE1)會激活級聯(lián)反應，然而這種級聯(lián)調節(jié)通過P2Y12蛋白受體被ADP抑制。
在檢測時，VASP的磷酸化與P2Y12受體抑制效應密切相關，而VASP的非磷酸化狀態(tài)與P2Y12 受體激活相關。
噻氯匹定和氯吡格雷對血小板受體的抑制作用是不可逆的。這種效應通過PGE1的激活，同時ADP的加入，而使VASP保持磷酸化，而被證實。
本試劑盒利用雙色流式細胞測定術，通過VASP的磷酸化狀態(tài)的測定，從而檢測P2Y12受體活性。
2 方法：
先將全血單獨與PGE1孵育或與PGE1+ADP混合孵育。細胞滲透后，處于磷酸化狀態(tài)的VASP通過間接免疫熒光反應特異性的被單克隆抗體標記。使用雙色流式細胞分析測定單獨PGE1激活的和PGE1聯(lián)合ADP處理管的校準平均熒光強度（mean fluorescence intensities,MF1），經減去空白對照得到校正后的MFIc，即減去陰性對照之后的平均熒光強度。再計算血小板反應指數(shù)（Platelet reactivity index，PRI），即VASP磷酸化水平，評估標本中ADP抑制VASP磷酸化的程度。
3 試劑組成
| 名稱 |
組分 |
| Reagent 1 |
1x 60ml 瓶，稀釋液。 |
| Reagent 2a |
1 x 100ul瓶，PGE1。 |
| Reagent 2b |
1 x 200ul瓶，PGE1 + ADP |
| Reagent 3 |
1 x 300ul 瓶，固定劑 |
| Reagent 4a |
1 x 200ul 瓶，抗VASP-P 小鼠單抗+滲透劑 |
| Reagent 4b |
1 x 100ul 瓶，陰性同型對照（小鼠單抗）+滲透劑 |
| Reagent 5 |
1 x 300ul 瓶，染液，F(xiàn)ITC 標記抗小鼠IgG多抗+血小板復染試劑
（抗CD61-PE標記）+滲透劑 |
注：提供Reagent 2a和Reagent 2b是過剩的。
4 需要自備的試劑
1）旋渦混勻器
2）計時器
3）流式細胞儀
4）移液器、槍頭
5）上樣管
5 試劑制備及保存
未開封包裝的試劑可在2-8℃條件下，至包裝上注明的有效期內。
注：忌冷凍。
所有試劑為即用型試劑，開封后，無污染的條件下，2-8℃可保持穩(wěn)定性2月。
注意：
1）Reagent 3中含有2%-5%的多聚甲醛，吸入或皮膚接觸會引起過敏。請按要求安全操作。
2）所有試劑包含疊氮鈉(0.09%)防腐劑,請按要求操作，當皮膚接觸到相關試劑時，用大量水徹底沖洗。
