背景簡介：

破骨細胞是一種多核的，具有骨吸收功能的骨組織細胞，在骨吸收過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。破骨細胞骨吸收功能的異常會引發(fā)一系列的病癥，如骨質(zhì)疏松癥、關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體松動、骨硬化癥和牙周病變等。破骨細胞骨吸收功能的研究對于各類骨疾病的防治具有重要意義。在破骨細胞骨吸收研究中，不僅要了解破骨細胞骨吸收過程，還需要評價破骨細胞的骨吸收功能。骨吸收陷窩形態(tài)分析法，被廣發(fā)用于評價破骨細胞骨吸收功能研究。

檢測原理：

當破骨細胞粘附在骨基質(zhì)表面，會在其骨基質(zhì)質(zhì)檢形成一個局部微酸環(huán)境，進而發(fā)揮骨吸收功能兵形成吸收陷窩，即骨吸收陷窩。骨吸收陷窩是破骨細胞骨銷售的最直接結(jié)果，其數(shù)量，大小和深度能直接反映破骨細胞骨吸收的能力。骨吸收陷窩形態(tài)分析法是通過對骨吸收陷窩進行形態(tài)計量分析，來評價破骨細胞骨吸收功能，該方法是目前判斷破骨細胞骨吸收功能的最可靠方法。

北京博蕾德生物技術(shù)有限公司提供用于200um, 400um 厚度破骨細胞骨吸收功能檢測骨切片，適用于96孔板檢測。

產(chǎn)品描述：

開始骨吸收實驗前用培養(yǎng)基重懸骨切片，成熟或早熟的破骨細胞，無論是由外周血單核細胞（PBMC）或共培養(yǎng)產(chǎn)生的，都可以將細胞分散覆蓋于骨切片上。根據(jù)破骨細胞的成熟形態(tài)和影響因素，凹點會在3-14天出現(xiàn)。破骨細胞數(shù)量可通過Tracp 活性實驗來觀察，吸收凹點和溝可通過甲苯藍染色觀察（如圖2.）。

來源：骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成，完全適合96孔板，直徑6mm。

厚度：1）0.2mm（適用于免疫熒光，共聚焦實驗）。
        2）0.4mm（適用于下游分析）

儲存：置于4°C下96%乙醇中。

應(yīng)用：用于骨吸收實驗檢測，通過破骨細胞的骨吸收形成的吸收坑，可以用來監(jiān)測培養(yǎng)的破骨細胞的骨吸收情況，完全適合96孔板。

操作流程：

該方法提供一種易于檢測的定量方案，用于體外測定破骨細胞介導的骨吸收。破骨細胞接種于骨切片上，吸收坑的形成可以通過甲苯胺藍染色進行定量。

實驗材料和試劑：

1. 破骨細胞
2. 骨切片
3. 異丙醇
4. 甲苯胺藍（Sigma cat#198161）
5. 超純水
6. 96孔細胞培養(yǎng)板（Greiner , Cat#650185）

實驗設(shè)備：

1. 骨形態(tài)測量系統(tǒng)(http://www.osteometrics.com/product_info.htm)
2. 超聲波清洗器

操作流程：

1. 破骨細胞接種于（250000 細胞/孔）含和不含顱骨成骨細胞的96孔細胞培養(yǎng)板上（提前孔內(nèi)放置骨切片）。
2. 細胞在合適的培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)至少14天。
3. 此后，用PBS洗滌細胞兩次，在250ul 70%異丙醇中，用超聲波高功率處理至少15分鐘，使細胞從骨切片脫落。
4.  
4. 加入100ul 甲苯胺藍溶液（1%溶解于水），室溫染色2分鐘。
5. 用250ul 超純水沖洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的殘留物。

吸收坑被染成深藍色（圖1），吸收坑面積可以通過骨測量系統(tǒng)進行量化或者吸收坑可通過光學顯微鏡觀察計數(shù)。


參考文獻：（以上流程來源于參考文獻，僅供參考）
Scholtysek, C., Katzenbeisser, J., Fu, H., Uderhardt, S., Ipseiz, N., Stoll, C., Zaiss, M. M.,
Stock, M., Donhauser, L., Bohm, C., Kleyer, A., Hess, A., Engelke, K., David, J. P.,
Djouad, F., Tuckermann, J. P., Desvergne, B., Schett, G. and Kronke, G. (2013).
PPARbeta/delta governs Wnt signaling and bone turnover. Nat Med 19(5): 608-613.

產(chǎn)品訂購：
 

品牌	英文名稱	中文名稱	貨號	規(guī)格
Bone slice	Bone Slices	骨切片	250	50片（200um）
Bone slice	Bone Slices	骨切片	200	50片(400um)
IDS	Bone Slices	骨切片	DT-1BON1000-96	50片（200um

 

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