a2+作為細(xì)胞內(nèi)的第二信使，調(diào)控著許多重要的生理活動(dòng)。在與Ca2+結(jié)合條件下，熒光探針顯現(xiàn)出光譜響應(yīng)；這使研究者可以通過利用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光分光鏡和熒光分光儀等來研究細(xì)胞內(nèi)部游離的Ca2+濃度的變化。而Fluo-3結(jié)合鈣離子后的吸收波長為506nm，發(fā)射波長為526nm（綠色）。常被用488型激光發(fā)生器激發(fā)。

Fluo-3的保存和溶解：

1. 收到貨后，應(yīng)置于-20℃保存
2. 推薦用DMSO溶解探針，溶解前應(yīng)將DMSO 和Fluo3均在室溫平衡。溶解過程較慢，請(qǐng)保持足夠的溶解時(shí)間。如果要長期保存，請(qǐng)用無水DMSO溶解，溶解后的儲(chǔ)液密封置于-20℃保存。同樣儲(chǔ)液在每次開蓋前都要置于室溫平衡，以避免水汽凝結(jié)在長期保存中，造成探針?biāo)?。一般推薦的儲(chǔ)液濃度為1-5mM，工作液濃度一般為：1-5 µM。為了防止出現(xiàn)較高背景及非特異性染色，探針的終濃度要盡可能低。
3. 公司在每次發(fā)貨時(shí)，都給客戶提供免費(fèi)的F-127助溶劑，用于探針溶解。 如果用純的DMSO長時(shí)間溶解不了，請(qǐng)配制20%的F127 DMSO溶液，加速溶解。

Fluo-3和Fura-2的區(qū)別：

Fluo-3和Fura-2相比，其優(yōu)點(diǎn)是：一方面可以被氬離子激光（argon-ion laser）的488nm激發(fā)光激發(fā)，便于檢測(cè)；另一面，F(xiàn)luo-3和鈣離子結(jié)合后熒光變化更強(qiáng)，即對(duì)鈣離子濃度變化的檢測(cè)更加靈敏；同時(shí)，F(xiàn)luo-3和鈣離子的結(jié)合能力較弱，這樣可以比Fura-2檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)更高濃度的鈣離子水平；此外，對(duì)于細(xì)胞內(nèi)的鈣離子的即時(shí)變化反應(yīng)得更加準(zhǔn)確，減小了因?yàn)楹外}離子解離速度慢而導(dǎo)致的熒光變化滯后。Fluo-3廣泛地用于流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微掃描中。

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