不脫鈣骨切片能更好地保持細(xì)胞結(jié)構(gòu),使觀察的骨組織結(jié)構(gòu)及其成分不失真,為研究骨組織成分、骨形成及骨形態(tài)計量學(xué)提供保證;并且可區(qū)別礦化骨和類骨質(zhì),用于診斷和測量骨礦化過程的異常。
本實驗的半薄切片機(jī)可以直接制作5μm的切片,不需要進(jìn)行磨片,因此對組織浪費少。本實驗室的LeicaDM6000B生物顯微鏡及LeicaQWin圖像分析系統(tǒng),可以進(jìn)行骨形成與骨吸收指標(biāo)的檢測。
1、可檢測的標(biāo)本:本實驗室可以檢測的標(biāo)本是大鼠/小鼠脛骨、股骨。
2、本實驗室制作切片的優(yōu)點與缺點:
1)抗原的活性損失?。罕緦嶒炇也捎玫蜏匕窦夹g(shù)制作不脫鈣骨切片,可以較好的保護(hù)抗原的活性,可采用免疫組化的方法進(jìn)行抗原活性的檢測;
2)?。罕緦嶒炇抑苽涞那衅^薄,厚度可達(dá)5μm,可以進(jìn)行細(xì)微結(jié)構(gòu)的觀察;
3)制作切片的數(shù)量多:采用本實驗切片機(jī)制作的切片為5μm,不需要進(jìn)行磨片,因此對組織浪費少,每個大鼠脛骨可制作10張切片,小鼠脛骨可制作5張切片;
4)制片成功率高:本實驗室制片成功率可達(dá)90%以上。
1)小體積樣品:受切片機(jī)的限制,只能進(jìn)行小組織的切片的制作,如大鼠股骨、脛骨;
2)時間長:由于本實驗室采用低溫包埋技術(shù)制作不脫鈣骨切片,所以制片時間較長,制片時間周期為3個月。
1)大鼠標(biāo)本:770元/樣品(含2張切片,一張白片用于檢測MAR、mAR,另一張進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色以檢測TBV%、TRS%、TFS%、OSW、),30個樣品起做。
2)小鼠標(biāo)本:1100元/樣品(含2張切片,一張白片用于檢測MAR、mAR,另一張進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色以檢測TBV%、TRS%、TFS%、OSW、),30個樣品起做。
明場:22元/樣本(包括50倍,100倍,400倍各一張)
熒光:熒光染料需要在動物處死前標(biāo)記好,其中標(biāo)記一種熒光染料的拍攝圖像一張20元/樣元,標(biāo)記二種熒光染料可拍攝圖像各一張30元/樣品,倍數(shù)自定一種,圖像質(zhì)量的好壞與熒光染料的標(biāo)記有關(guān)。
本實驗室可以進(jìn)行以下指標(biāo)的檢測:骨小梁面積百分比(TBV%)、骨小梁吸收表面百分比(TRS%)、骨小梁形成表面百分比(TFS%)、類骨質(zhì)平均寬度(OSW)、骨小梁礦化率(MAR)、骨皮質(zhì)礦化率(mAR)。這些指標(biāo)可以反映骨形成與骨吸收的情況。每個指標(biāo)分析周期為10個工作日,全套指標(biāo)(共6項)價格可優(yōu)惠至260元/樣本。
每項指標(biāo)所反應(yīng)的意義如下:
(1)骨小梁面積百分比(TBV%):骨小梁面積占被測骨髓腔總面積的百分比,55元/樣本;
(2)骨小梁吸收表面百分比(TRS%):不規(guī)則、凹凸不平的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比,55元/樣本;
(3)骨小梁形成表面百分比(TFS%):有成骨細(xì)胞被覆的類骨質(zhì)表面占骨小梁表面的百分比,55元/樣本;
(4)類骨質(zhì)平均寬度(OSW):皮質(zhì)內(nèi)表面有成骨細(xì)胞被覆的類骨質(zhì)的平均寬度,50元/樣本;
(5)骨小梁礦化率(MAR):骨小梁表面熒光雙標(biāo)記帶的平均距離除以兩次標(biāo)記相隔的天數(shù),可反映骨小梁礦化速度,88元/樣本;
(6)骨皮質(zhì)礦化率(mAR):皮質(zhì)內(nèi)表面熒光雙標(biāo)記帶的平均距離除以兩次標(biāo)記相隔的天數(shù),可反映皮質(zhì)骨礦化速度,88元/樣本。
本室制備的不脫鈣骨切片的代表性圖片(甲苯胺藍(lán)染色法及熒光標(biāo)記)
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